動(dòng)物疫病血凝分析儀型號(hào):DY-7000
試驗(yàn)方法:
1 血凝(HA)試驗(yàn)
1) 在V型微量反應(yīng)板的1~12孔均孔加入0.025ml PBS,換滴頭。
2) 吸取0.025ml血凝抗原加入*孔,混勻。
3) 從第1孔吸取0.025ml血凝抗原加入第2孔,混勻后吸取0.025ml加入第3孔,如此進(jìn)行對(duì)倍稀釋至第11孔,從第11孔吸取0.025ml棄去,換滴頭。
4) 每孔再加0.025ml PBS。
5) 每孔均加入0.025ml 1%(V/V)雞紅細(xì)胞懸液(將雞紅細(xì)胞懸液充分搖勻后加入)。
6) 將反應(yīng)板在振蕩器上震蕩1~2分鐘或輕扣反應(yīng)板混合反應(yīng)物,在室溫(20~25℃)下靜置40分鐘后觀察結(jié)果,(如果環(huán)境溫度太高,可置4℃環(huán)境下),在對(duì)照孔紅細(xì)胞顯著呈鈕扣狀時(shí)判定結(jié)果。
7) 結(jié)果判定 將板傾斜,觀察紅細(xì)胞有無(wú)呈淚滴狀流淌。*血凝(不流淌)的抗原或病毒zui高稀釋倍數(shù)代表一個(gè)血凝單位(HAU)。
2 血凝抑制(HI)試驗(yàn)
1) 根據(jù)HA試驗(yàn)測(cè)定的效價(jià),計(jì)算配制4個(gè)血凝單位(4HAU)抗原。以*血凝的病毒zui高稀釋倍數(shù)作為終點(diǎn),終點(diǎn)稀釋倍數(shù)除以4即為含4HAU抗原的稀釋倍數(shù)。例如,HA效價(jià)為1:256,則4HAU抗原的稀釋倍數(shù)應(yīng)是1:64(256除以4)。
2) 加稀釋液:
在微量反應(yīng)板的第1~11孔加入0.025ml PBS,第12孔加入0.05ml PBS。
3) 稀釋待檢血清:
取1號(hào)待檢血清0.025ml加入*排第1孔,充分混勻后吸0.025ml于第2孔,依次對(duì)倍稀釋至第10孔,從第10孔吸取0.025ml棄去。
取2號(hào)待檢血清加入第2排;取3號(hào)待檢血清加入第3排……均按上法稀釋。
注意!每取一份血清時(shí),必須更換吸頭。
4) 稀釋陰性血清:
在血凝板的第7排*孔加陰性血清0.025ml,對(duì)倍稀釋至第3孔,混勻后從該孔取出0.025ml棄去。
5) 稀釋陽(yáng)性血清:
在血凝板的第8排第1孔加陽(yáng)性血清0.025ml,對(duì)倍稀釋至第10孔,混勻后從該孔取出0.025ml棄去。
6) 第1~11孔均加入含4HAU混勻的病毒抗原液0.025ml,在室溫(20~25℃)下靜置30分鐘或2~8℃ 50分鐘。
7) 每孔加入0.025ml 1%(V/V)的雞紅細(xì)胞懸液,震蕩混勻,在室溫(20~25℃)下靜置20~30分鐘或2~8℃ 45~60分鐘,對(duì)照紅細(xì)胞將呈明顯鈕扣狀沉于孔底。
結(jié)果判定
以*抑制4 HAU抗原的zui高血清稀釋倍數(shù)判為該血清的HI效價(jià)。
只有陰性對(duì)照孔血清滴度不大于2log2,陽(yáng)性對(duì)照血清誤差不過(guò)1個(gè)滴度,試驗(yàn)結(jié)果才有效。
禽流感滅活疫苗的免疫效果判定:家禽免疫后21天進(jìn)行免疫效果監(jiān)測(cè)。禽流感抗體血凝抑制(HI)抗體效價(jià)≥24判定為合格
存欄家禽抗體合格率達(dá)到≥70%判定為合格。
新城疫免疫效果監(jiān)測(cè):免疫21天后,進(jìn)行免疫效果監(jiān)測(cè)。抗體血凝抑制試驗(yàn)抗體效價(jià)≥25判定為合格
存欄家禽抗體合格率達(dá)到≥70%判定為合格。
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